蝴蝶兰属热带气生兰, 花形似蝴蝶, 因而得名。其花形态美丽, 色彩丰富, 花期长, 在热带兰中有“ 兰花皇后”之美称, 是近年来最受欢迎的洋兰之一。蝴蝶兰是单茎性气生兰, 植株极少发育侧芽, 且种子极难萌发, 对其进行常规性的繁殖, 增殖速度很慢。因此, 多采用组织培养的方法对其进行快速繁殖, 以达到工厂化育苗的目的。
1 .外植体
蝴蝶兰的快速繁殖可选用的外植体有茎尖、茎段、叶片、花梗腋芽、花梗节间、根尖等, 其方法各异, 难度各有高低。
2 .采样、消毒与初代培养
选用的外植体不同, 其采样、消毒与初代培养的方法也不相同。下面分别就各种方法做一介绍:
(1 )花梗腋芽培养
将蝴蝶兰花梗剪下, 用75%酒精棉球擦拭, 切成约5 厘米的每节带芽小段, 仔细除去苞片, 防止伤及嫩芽,然后用2%次氯酸钠溶液消毒20 分钟, 其间不停地摇动。消毒后用无菌水冲洗3~5 次, 放到培养皿中。用4 号解剖刀将两端各切去0 .5 厘米, 芽体朝上插接在1/ 2MS+ 3 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤培养基上。培养基中还需加入蔗糖20 克/ 升, 水解乳蛋白1 克/ 升, 琼脂8 克/ 升, 活性炭1 克/ 升, 调pH 值为5 .6。
(2 )茎尖培养
茎尖是组培成功率较高的部位, 但蝴蝶兰的茎尖深藏于叶片夹缝中, 分离和消毒都比较困难。茎尖的取材有两种方法: 一是将除去叶片的茎用水冲洗, 再用10% 的漂白粉溶液作表面灭菌15 分钟( 每100 毫升消毒液加1 滴吐温20 ) , 除去叶原基后, 再用5% 漂白粉液灭菌10 分钟, 然后用无菌水冲洗。
切取茎尖和各叶基部的腋芽, 大小约2~3 毫米, 接种到培养基上,用添加15%椰乳的V&W 培养基进行液体培养,或加9 克/ 升琼脂进行固体培养。培养温度为25 ℃ , 光强2 000勒克司, 每天光照时间为16~24 小时。液体培养以160 转/ 分钟速度做震荡培养, 7~10 天再转至新培养基。从开始培养算起, 1个月后转到固体培养基。在这种条件下培养1 个月即可形成原球茎状球体, 以后可继代增殖。二是先诱导花梗侧芽成为植株, 再利用试管苗的茎尖进行培养。其方法是: 在双目镜下剥取约0 .3 毫米大小的茎尖, 接种到MS(附录表1 1) + 3 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤固体培养基上, 在温度( 25±2 ) ℃ , 光强1 500 勒, 每天光照10小时条件下培养。14 天可见茎尖膨大, 呈浅绿色半球状, 3 个月后, 长成桑果状原球茎状体, 组织块6 毫米。此方法最大的优点是免去了外植体消毒的程序, 成功的可能性较大。